Stała ekspozycja Muzeum Ikon w Supraślu prezentuje bogactwo sztuki cerkiewnej od XVI do XXI wieku, ukazując kanon ikon bizantyjskich, wizerunki Chrystologiczne i Maryjne, a także ikony podróżne i staroobrzędowe. W sali „Podlasie” zobaczymy relikty dawnych świątyń regionu, a w części poświęconej ikonom z terenów dawnej Rzeczypospolitej – unikatowe przykłady sztuki kształtowanej na styku kultur Polski i Rusi. Szczególne miejsce zajmują tu Freski Supraskie – ocalałe fragmenty XVI-wiecznej polichromii z cerkwi Zwiastowania NMP. W muzeum działa też sala im. Jerzego Nowosielskiego, poświęcona jego twórczości i inspiracjom, które pozostawił w sztuce współczesnej.